2、注射用天花粉对假孕兔子宫孕酮受体(P-R)和雌醇受体(E-R)的影响
取健康成熟雌兔,体重2.5kg以上,静脉注射人绒毛膜促性腺激素(HCG)500单位以产生假孕,注射当天作为假孕1日,然后将动物分成2组,每组7-8只。
于假孕第6日、7日给天花粉组每天肌肉注射天花粉注射剂,临用前用生理盐水溶解到5mg/2ml)2mg/kgl次。
对照组每天注射生理盐水0.8ml/kgl次。于第8日由耳缘静脉取血2ml于含肝素(约0.5mg)的离心管中,离心得血浆供测孕酮用。
然后将兔放血处死,立即剖腹取下子宫,剪取一段子宫放入营养液中,供进行离体子宫实验,其余部分用冰生理盐水洗3次,剪碎后与缓冲液按1:3(W/V)比例混合,置于匀浆管中,在低温条件下制成匀浆,供受体测定用。
P-R、E-R的测定和KA值的求得采用放射受体测定法,参考Rayard等和Andersan等的方法结合本实验条件略加修改。
按Loury法测定子宫胞质液的蛋白含量,二苯胺法测定子宫细胞核的DNA含量,胞质液受体fmol/mg蛋白表示,核受体是以fmol/mgDNA表示。
作Scatchardplot求得孕酮和P-R及雌二醇和E-R的KA值。
血浆孕酮浓度测定按horneycroft报告的方法,以11a羟孕酮琥珀酸酐牛血清蛋白为抗原,对家兔进行免疫,抗血清效价1:2000以上。
实验结果表明,假孕第八天子宫胞质液和细胞核的P-R含量经t测验,两组间有显著差异,说明注射天花粉后,能使假孕兔子宫的P-R含量降低。
作Scatchardplot求得孕酮和胞质液P-R的KA值:对照组KA=1.08x10(9)M-1,天花粉组KA=0.28x10(9)M,说明天花粉使孕酮和P-R的亲和力明显下降。
假孕第八天子宫胞质液和细胞核的E- R含量,经t测验,二组间无明显差异,雌二醇和E-R的KA值:对照值KA=1.01x10(9)M-1,天花粉组KA=1.1×10(9)M-1,两组间也无显著差异,表明天花粉组对假孕兔子宫E-R无明显影响。
假孕兔第8日血浆孕酮浓度对照组与天花粉组之间无明显差异。
一般认为子宫活动受激素调节,Csapo等报道妊娠子宫所以处于静息状态,是与体内血浆孕酮浓度较高有关,妊娠兔子宫活动可被孕酮所阻抑,并使之对催产素和前列腺素均不敏感。
束怀德等。曾报导天花粉能使妊娠兔子宫自发收缩活动增加,认为这种作用可能与天花粉损伤胚胎,使体内孕酮水平下降及促使蜕膜释放前列腺素有关。
实验采用假孕兔测得第8日的血浆孕酮浓度,与Balduin等,报道的同期孕兔血浆孕酮浓度相近,注射天花粉后孕酮浓度并不下降,与对照血相似,但能使子宫自发收缩明显增加,说明天花粉对胚胎和蜕膜的损伤以及继发的孕酮下降,可能不是天花粉引起子宫自发收缩增加的主要机理。
Hai等报道妊娠大鼠在临床前子宫细胞核中P-R含量下降,认为临床子宫活动增加是由于子宫内P-R含量减少所致。
实验曾观察到15-甲-PGF2a对假孕兔有溶黄体作用,血浆孕酮浓度于注射15-甲-PGF2a后24小时下降到极低水平,此时子宫P-R受体含量增加,子宫并无明显自发收缩仍处于静息状态。
天花粉不改变假孕兔血浆孕酮浓度,但使子宫P-R含量降低并使孕酮与P-R的亲和力下降,而同时子宫自发收缩活动明显增加。
因此设想,天花粉使子宫P-R含量减少和使孕酮与P-R的亲和力降低,可能是天花粉使子宫自发收缩活动增加的重要机理,子宫P-R可能与子宫活动调节有关。