肥厚型心肌病有心室流出道梗阻的患者，因具有特征性临床表现，诊断难度不大。超声心动图检查对肥厚型心肌病的诊断帮助很大，是极重要的无创性诊断工具。室间隔厚度大于等于18厘米，并有二尖瓣收缩期前移，足以区分梗阻性和非梗阻性患者。有的病人临床上无症状，在经超声心动图检查后便可提示存在肥厚型心肌病。左心导管检查和心室造影，可以证实诊断是否正确。
临床上闻及胸骨下段左缘收缩期前杂音，怀疑是梗阻型肥厚型心肌病时，可以通过改变左室流出道收缩期压力差观察杂音变化进而帮助诊断。
具体方法可采用：
含化硝酸甘油，吸入亚硝酸异戊酯。滴入异丙肾上腺素，作Valsalva动作时或用洋地黄类强心药后，体力劳动后或过早搏动后，心肌收缩力加强或静脉回流减少，左室流出道梗阻加重，杂音增强。
用血管收缩药，如去甲肾上腺素等;在下蹲、紧握拳时，应用β-受体阻滞剂，如普萘洛尔等;心肌收缩力减弱或周围阻力增强或静脉回流增加，左心室流出道梗阻可减轻，听诊时杂音减弱或明显减弱。但近年来，随着心脏超声技术的日益进步，药物试验的方法用的已经很好。
肥厚型心肌病尤其是梗阻型诊断的确立，还需与室间隔缺损、主动脉瓣狭窄、风湿性二尖瓣关闭不全、冠心病等疾病鉴别诊断。
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