如地塞米松试验暗示肾上腺肿瘤或异位acth综合征,则可测定血浆acth浓度.异位acth综合征,血浆acth显著增高(通常>200pg/ml),肾上腺腺瘤所致库欣综合征acth如此低以致难以检出,除非罕见情况是acth分泌肾上腺肿瘤.库欣病病人,通常有中等高血浆acth水平(75~200pg/ml).实验室结果同样可以支持异位acth作为库欣综合征病因的包括：低血k(<3.0meq hco3-="">30meq/l,9am血清皮质醇>200μg/dl(>5520nmol/l),尿游离皮质醇排泄>450μg/24h(>1242nmol/24h).
crh试验(见上文艾迪生病的实验检查)通常可以对异位acth肾上腺皮质功能亢进,肾上腺腺瘤过高分泌(该试验无反应)和垂体型库欣病(反应正常或增高)加以鉴别.然而这一试验可以误导诊断,因为正常和异常反应有重叠.当与阳性地塞米松试验相结合,具有最大价值.
肾上腺功能亢进确诊以后,评估库欣综合征同样应该包括ct但更好是mri垂体检查.如肿瘤的存在或垂体肿瘤定位不肯定,则最有用的方法是给病人crh1μg/kg,在用药前后抽取两侧岩下静脉窦血液同时测定acth水平.正常两侧反应相等,兴奋前来自肿瘤静脉窦血液acth水平高于无肿瘤侧,对crh有较大反应.异位acth病人两侧acth增高相等,对crh无反应.此外,非垂体acth产生的肿瘤必须仔细寻找.给予病人放射性碘化胆固醇后,肾上腺扫描可以鉴别增生与腺瘤或癌,然而,假如生化实验提示肾上腺肿瘤存在,肾上腺区ct(这时mri并不优于ct)为首选.
儿童与成人诊断方法和标准相同,除非孕妇为了免于照射更喜欢mri.
肝脏病的氢化可的松过多症有些慢性肝病,尤其是嗜酒者,临床表现类似库欣综合征.实验室检查示血浆皮质醇增高和有限的昼夜变化.皮质醇分泌率正常.高血浆皮质醇部分是由于减少了肝脏氧化皮质醇转变成无活性代谢产物(皮质素)能力,但持续高皮质醇同样暗示减少了下丘脑-垂体-肾上腺反馈机制的敏感性,应该减少acth分泌(但并非如此).改善肝功能可以纠正这一异常.皮质类固醇活性阻滞剂如酮康唑,可有帮助.