库欣综合征临床表现多样，缺乏特异性，少数症状和体征具有鉴别诊断意义，如皮肤瘀斑、多血质、近端肌无力、大于1cm的皮肤紫纹和儿童体重增加并伴有生长发育停滞，其它由皮质醇增多所致的乏力、抑郁、肥胖、糖尿病、高血压或月经不规律等也常见于普通人群中，库欣综合征易被诊断，但非典型库欣综合征患者的诊断则有一定难度。
库欣综合征的诊断分三个方面：确定疾病诊断，病因诊断和定位诊断。
一、确定疾病诊断
主要依典型的临床症状和体征，如向心性肥胖，紫纹，毛发增多，性功能障碍，疲乏等，加上尿17羟皮质类固醇排出量显著增高，小剂量氟美松抑制试验不能被抑制和血11羟皮质类固醇高于正常水平并失去昼夜变化节律即可确诊为皮质醇症，早期轻型的病例应与单纯性肥胖相鉴别。
二、病因诊断
即区别是由肾上腺皮质腺瘤，腺癌，垂体肿瘤引起的皮质增生，非垂体肿瘤或异源性ACTH分泌肿瘤引起的皮质增生。其它影像学诊断方法肾上腺正常，部分垂体有占痊患侧肾上腺占位患侧肾上腺占位肾上腺正常，可能发现分泌异源ACTH的病灶。
1.蝶鞍的X线学诊断
垂体肿瘤可引起视神经受压而出现颞侧偏盲，在蝶鞍X线点片上可见鞍底，鞍背骨质疏松脱钙，前后突吸收，蝶鞍扩大，分层片或cT则可显示更小的垂体肿瘤，这种由垂体肿瘤引起继发性肾上腺皮质增生者约占皮质醇症的10%。
2.大剂量氟美松抑制试验
方法与小剂量氟美松试验相同，但第3～4天每6小时服氟美松2mg，服药后尿24小时17羟皮质类固醇排出量比服药前减少50%以上为阳性反应，异源 ACTH分泌肿瘤，皮质腺瘤，皮质腺癌的分泌功能均是自主性的，对此试验均不起反应，而皮质增生者则可有明显抑制呈阳性反应，皮质增生伴小腺瘤或结节性增生者尽管ACTH兴奋试验可阳性，但大剂量氟美松却不能抑制其分泌(即兴奋得起，但抑制不下)，此时需作其它试验来区别是皮质肿瘤还是增生。
三、定位诊断
主要是肾上腺皮质肿瘤的定位，以利手术切除，但定位的同时，也常解决了病因诊断。
1.X线胸片
可除外肺癌和肺转移灶。
2.静脉肾盂造影
了解双肾情况，较大的肾上腺肿瘤可将患侧肾脏向下推移。
3.腹膜后充气造影
由于肾上腺皮质腺瘤一般不太大，且肥胖病人腹膜后大块状脂肪组织常可导致误诊，现已少用。
4.B超
方便有效，对肾上腺皮质肿瘤的定位诊断的正确率可达90%以上。
5.CT
对直径0.5～1cm以上的肾上腺皮质腺瘤大多能正确定位。