胰岛素瘤指因胰岛β细胞瘤或β细胞增生造成胰岛素分泌过多，进而引起低血糖症;医生根据询问病人的疾病史、参考临床症状表现和实验室检查资料结果可以诊断。胰岛素瘤的检查方法如下。
一、化验室检查
1.空腹血糖测定
禁食15小时，空腹血糖在2.78mmol/L以下者，可确诊为胰岛素瘤。对一些轻症病人，禁食可延长至24～48小时以上，以诱时发作。本病病人多在禁食15～36小时内出现低血糖症状，如果禁食60～72小时仍不发作，可排除胰岛素瘤。
2.胰岛素测定
测定病人的空腹或发作时周围静脉血胰岛素水平,是确诊为胰岛素瘤的直接依据。正常人空腹周围血胰岛素水平为5～30μU/ml，平均低于24μU/ml。本病病人不仅胰岛素水平显著升高，即使在低血糖状态下胰岛素水平仍然高(可达100～200μU/ml)，为本病最特异试验。
除了空腹测定外，还可在手术中经门静脉取血测定胰岛素，方法为：手术中在办理输葡萄糖液前用细针穿刺门静脉主干取血，测定血糖和胰岛素水平。如门静脉主干血的胰岛素大于100μU/ml时，应考虑有胰岛素瘤存在的可能，如胰岛素值大于200μU/ml，可诊断为胰岛素瘤。此法在诊断上的特异性优于周围静脉血所测定的结果;也可用于判断胰岛素瘤是否已切除完全。
3.空腹周围静脉血胰岛素浓度与葡萄糖浓度的比值(IRI/G)诊断法
病人禁食15～72小时，再检测周围静脉血胰岛素和葡萄糖水平，并计算胰岛素(IRI)和葡萄糖(G)比值。正常人IRI/G小于0.3;如大于0.3可诊断胰岛素瘤。本方法比单独测定胰岛素或血糖更为准确。
4.甲磺丁脲(D860)激发试验
甲磺丁脲可刺激胰岛释放胰岛素，产生持续3～5小时的低血糖。
(1)静脉法
早晨空腹抽血测血糖后，静脉注射甲磺丁脲(20～25mg/kg体重，溶于20ml生理盐水中)，于注射后5、15、30、45、60分钟各测血糖1次，第2、3小时每半小时测血糖1次，观察血糖变化。正常人在用药后半小时血糖达最低值，1.5～2小时恢复正常。胰岛素瘤病人注药后5～15分钟出现明显低血糖，且2～3小时后低血糖仍不恢复。
(2)口服法
口服甲磺丁脲和碳酸氢钠各2g，然后每半小时测血糖1次，连续5小时。正常人于服药后1～3小时内血糖达最低值;胰岛素瘤病人可早期出现血糖最低值，且持续3～5小时血糖不回升，血浆胰岛素含量增高。
二、定位检查
1.无创性检查
(1)B超
由于B超检查具有简便、无创和费用低廉等优点，有一定的应用价值。
(2)电子计算机断层扫描
在胰岛素瘤的定位诊断中，CT是最广泛应用的无创性检查方法，且增强扫描比平扫的敏感性更高，能更好地了解肿瘤与胰腺、胆总管之间的关系。
(3)核磁共振
随着核磁共振检查的逐步推广，也已开始用于胰岛细胞瘤的定位诊断。由于本项技术开展较晚。而胰岛素瘤又十分少见，故目前尚无大宗检查应用报道，一般认为其敏感性与CT相仿。
2.有创性检查
(1)选择性腹腔动脉造影。
(2)经皮肝穿刺门静脉系统置管分段取血测胰岛素。
(3)术中B超。
(4)选择性动脉注射美蓝。